Phương pháp tách chiết ADN từ xương người

Quy trình kỹ thuật tách chiết ADN từ xương người cũng giống như tách chiết ADN từ mô và tế bào đều đòi hỏi phải ly giải được mẫu. Vì xương có bề mặt rất rắn chắc rất khó phá vỡ cho nên các qui trình tách xương đòi hỏi mẫu phải được nghiền nhỏ. Ngoài ra, việc nghiền mẫu rất khó và đôi khi không khả thi, kỹ thuật công nghệ sinh học mới cho phép dùng các ống sử dụng áp lực để chiết xuất ADN từ những mảnh xương nhỏ

Khử trùng Như bất kỳ một bước khởi đầu bất kỳ của các loại tách chiết ADN, việc khử trùng mẫu được thực hiện để giảm thiểu nguy cơ lây nhiễm mẫu chéo. Bề mặt của mẫu xương cần được xử lý ban đầu bằng thuốc tẩy và nước cất. Ngoài ra tất cả các dụng cụ sử dụng phải được khử trùng bằng nồi hấp nhiệt. Đối với các dụng cụ lớn hơn mà không thể hấp khử trùng dùng thuốc tẩy và cồn làm sạch bề mặt mà mẫu tiếp xúc. Pipet và các dụng cụ xử lý mẫu cần thao tác trong tủ hút sạch.

Phương pháp nghiền mẫu

Các mẫu xương sau khi được làm sạch bằng thuốc tẩy và nước cất, bề mặt ngoài của xương được mài sạch. Quá trình này sẽ loại bỏ những chất lẫn bám trên bề mặt xương và giúp tiếp xúc với một số mô xương mềm cần thiết cho việc tách chiết ADN. Các mẫu xương sau đó được nghiền thành bột. Cần sử dụng 750mg bột xương và 1.6 ml dung dịch đệm phân giải. Theo một phương pháp công bố trong một nghiên cứu về axit Nucleic dung dịch đệm phân giải gồm EDTA 0,1M, dung dịch muối và proteinaaseK. Hỗn hợp này cho ủ qua đêm ở 370C để phân giải tối ưu mẫu xương để giải phóng ADN.

Sau khi ủ qua đêm, các mẫu được ly tâm tốc độ cao để loại bỏ các tạp chất không cần thiết. Loại bỏ cặn lắng, bổ sung thêm muối amoni acetat và tủa ADN ở pha trên trong cồn tinh khiết để kết tủa ADN. Quá trình này thực hiện và ủ hỗn hợp trong đá lạnh để tối ưu hiệu suất tủa ADN. Hỗn hợp sau đó được ly tâm, loại bỏ dịch, thu và hòa tan ADN trong nước khử ion.

Phương pháp không nghiền xương thành bột

Một công ty công nghệ sinh học có tên Pressure BioSciences Inc đã tạo ra một phương pháp mới để tách chiết ADN từ xương mà không cần phải nghiền xương thành bột. Phương pháp này sử dụng công nghệ (PCT) chiết xuất ADN. Với công nghệ này có thể loại được sự lây nhiễm chéo thường xảy ra do sử dụng chung một máy nghiền cho các mẫu xương khác nhau. Tương tự như phương pháp nghiền xương thành bột các mẫu xương vẫn được khử trùng nhưng sau đó cắt thành các mảnh nhỏ khoảng 250mg để phù hợp các ống trong công nghệ dùng áp lực.

Quang Vinh (Công ty CPDV Phân tích di truyền – Gentis)

Từ điển Nguồn: www.ehow.com